update agar agar

[asklepios]

A me piacciono molto la prima e la seconda dall'alto sulla destra. Hanno una crescita molto aggressiva e abbastanza rizomorfica. Se per gli altri può esserci il dubbio, quel micelio è sicuramente quello del fungo. Per il prossimo transfer, se vuoi avere piastre ancora più carine, prendi un pezzo di agar più piccolo (dimensioni di un chicco di riso).

in SAB, apro appena appena la piastra e faccio "scolare" la stessa, stando attento a non creare contatto tra agar e acqua

Non vedo perché no, stai giusto attento come la apri. Un modo che ho trovato molto efficace è appoggiare una tazza con acqua calda sul coperchio per un paio di minuti. In ogni caso se arrivi ad avere talmente tanta condensa che si versa così facilmente vuol dire che probabilmente stai versando l'agar troppo caldo.

Ho un'altra domanda inoltre: se facessi i transfer domani, e tra 13 gg le metto in frigo quando vado in ferie, non creo casini al micelio?

Casini al micelio sicuramente no. Ad occhio e croce, puoi fare un'altro trasferimento prima dei 13 giorni oltre a domani oppure aspettare e in 13 giorni saranno sicuramente colonizzate completamente e pronte per essere utilizzate.

[Terenzio_Terenzio]

A me piacciono molto la prima e la seconda dall'alto sulla destra. Hanno una crescita molto aggressiva e abbastanza rizomorfica. Se per gli altri può esserci il dubbio, quel micelio è sicuramente quello del fungo. Per il prossimo transfer, se vuoi avere piastre ancora più carine, prendi un pezzo di agar più piccolo (dimensioni di un chicco di riso).

in SAB, apro appena appena la piastra e faccio "scolare" la stessa, stando attento a non creare contatto tra agar e acqua

Non vedo perché no, stai giusto attento come la apri. Un modo che ho trovato molto efficace è appoggiare una tazza con acqua calda sul coperchio per un paio di minuti. In ogni caso se arrivi ad avere talmente tanta condensa che si versa così facilmente vuol dire che probabilmente stai versando l'agar troppo caldo.

Ho un'altra domanda inoltre: se facessi i transfer domani, e tra 13 gg le metto in frigo quando vado in ferie, non creo casini al micelio?

Casini al micelio sicuramente no. Ad occhio e croce, puoi fare un'altro trasferimento prima dei 13 giorni oltre a domani oppure aspettare e in 13 giorni saranno sicuramente colonizzate completamente e pronte per essere utilizzate.

Ok, bene. Se tutto và come dovrebbe, stasera faccio un mini-update.

ciao e grazie!

[Terenzio_Terenzio]

Scusa l'ulteriore disturbo, ma dove trovo una tek per fare LC da agar @asklepios ? Ho guardato la wiki ma non ho trovato nulla

[Pregiudicato]

Ciao,
La crescita rizomorfica del micelio è sicuramente distintiva e può aiutare nel distinguere il micelio da altre muffe. Ciò detto, nella mia (per quanto limitata) esperienza, l'ho osservato raramente su agar, solo da una clonazione che ho fatto. Alcuni dicono che sia dovuto alla quantità di nutrienti nell'agar, ho provato a diminuire i nutrienti sia a fare un trasferimento su un pezzo di cartone (che di nutrienti dovrebbe averne ben pochi), di crescita rizomorfica neanche l'ombra. Nonostante questo, i funghi sono cresciuti e hanno esibito le classiche ramificazioni sui cereali. In ogni caso, pare non essere un tratto che riveste risvolti pratici (tipo maggiore potenza o aggressività del genotipo in questione), ma è più per una facilità di identificazione.

Tornando alle tue piastre comunque, mi sembra di vedere due fenotipi, uno più bianco latte e più denso, uno di un bianco meno intenso e con crescita più espansa e meno densa. Io fossi in te farei un trasferimento di entrambi, poi al secondo trasferimento annusi e ti rendi subito conto di quale profuma di funghi e quale no. Il fenotipo bianco molto denso potrebbe essere muffa, l'ho già visto in passato, ma non necessariamente. Purtroppo quando è così può diventare davvero difficile distinguere prima che avvenga la sporulazione. Vedere una piastra completamente colonizzata può comunque aiutare, in quanto il micelio, anche se non necessariamente rizomorfico, cresce in maniera piuttosto uniforme e regolare, mentre la muffa (per esempio il trichoderma), pur essendo bianca prima della sporulazione, cresce molto in fretta e ha un aspetto irregolare, quasi globoso. Io farei un paio di trasferimenti per entrambi e lascerei colonizzare la piastra per vedere come cresce e poterlo poi annusare.

Tutto quello che ho scritto sopra può ovviamente essere evitato se hai un fungo da clonare. Clonando elimini ogni dubbio. Poi è ovvio, se stai lavorando con una nuova varietà che ancora non hai cresciuto non c'è scampo, ma se già hai un fungo da clonare ti risparmi un bel po' di lavoro. Comunque sì, una volta che hai clonato il fungo puoi tranquillamente essiccarlo e consumarlo, alla fine lo stai solo tagliando, niente di dannoso, si seccherà anche più in fretta. C'è chi clona immergendo prima il fungo in candeggina, anche se personalmente non ho avuto successo con questo metodo, e lì è ovvio che poi lo devi buttare.

Bello quando trovi una persona che ha studiato che non ti costringe a dover rispondere alla chiamata per senso del dovere ahaha.
Comunque il mio micelio può essere sia rizomorfo che “non mi ricordo il nome haha, é passato un po’ di tempo” e da quanto ricordo é considerato mediamente più aggressivo della controparte...io sinceramente credo che non si tratti di nutrienti ma piuttosto di una questione genetica (ma non ci sono prove scientifiche)...non vedi il motivo di prendere il “mycelio non rizomorfo” siccome viene espressamente consigliato di prendere la ramificazione “singola” per cercare di ottenere una monocultura (anzi in realtà si cerca di prenderne il mono possibile anche se non di arrivare alla mono cultura, siccome potrebbe avere problemi/difetti...pertanto fai le prime 2/3 (max) scrematura, poi spawna e prendi il campione migliore e ripeti la procedura.
@Terenzio_Terenzio se ha un aspetto polveroso é quasi sicuramente thricoderma...te lo dico per esperienza , ma direi che se fosse questo il caso e con queste temperatura si sarebbe già mostrato il classico colore verdino.

[asklepios]

Scusa l'ulteriore disturbo, ma dove trovo una tek per fare LC da agar @asklepios ? Ho guardato la wiki ma non ho trovato nulla

Non ho ancora scritto una guida dedicata, più che altro volevo fare io le foto per non rubarle da Shroomery e ultimamente non ho avuto tempo. In ogni caso è molto immediato come processo, basta che fai un trasferimento anziché su una piastra di agar in un barattolo contenente il brodo sterilizzato. Va bene un barattolo modificato come per i cereali, solo che all'interno metti il brodo che usi generalmente per l'agar senza l'aggiunta di agar agar. Fanne magari un paio di barattoli nel caso che si contamini (molto facile). Se non hai l'agitatore magnetico, puoi aggiungere dei pezzetti di vetro o delle biglie, aiutano quando devi agitare. Una volta fatto il trasferimento aspetti e vedrai l'acqua riempirsi di micelio bianco sospeso. Se diventa opaca, è una contaminazione batterica e puoi buttare tutto. Fai un po' di prove, al massimo puoi inoculare un po' di cereali con l'agar, che lì vai sul sicuro, e poi alcuni con la LC. Il problema con la coltura liquida è che se è contaminata ti contamina ogni singolo barattolo. A tal proposito ti consiglio di testarla su agar, a colonizzazione completa, per assicurarti non contenga altro oltre al fungo. Ne prelevi un po' con un loop di inoculazione o la punta di un bisturi e strisci su agar.

non vedi il motivo di prendere il “mycelio non rizomorfo” siccome viene espressamente consigliato di prendere la ramificazione “singola” per cercare di ottenere una monocultura (anzi in realtà si cerca di prenderne il mono possibile anche se non di arrivare alla mono cultura, siccome potrebbe avere problemi/difetti...pertanto fai le prime 2/3 (max) scrematura, poi spawna e prendi il campione migliore e ripeti la procedura.

A me è capitato che il micelio non si mostrasse rizomorfo, ma comunque produce funghi ugualmente. L'ideale come dici tu sarebbe partendo da agar fare una decina o più di isolati, e poi crescere ognuno separatamente per determinare quale rende di più, per poi conservarlo. Un po' come una selezione genetica. È un processo che richiede un sacco di impegno e spazio però. Alla fine se uno non è proprio un appassionato e vuole solo vedere delle belle quantità di funghi, non c'è bisogno di farsi troppe paranoie con isolati e crescita rizomorfica, almeno così la penso io

[Terenzio_Terenzio]

Non ho ancora scritto una guida dedicata, più che altro volevo fare io le foto per non rubarle da Shroomery e ultimamente non ho avuto tempo. In ogni caso è molto immediato come processo, basta che fai un trasferimento anziché su una piastra di agar in un barattolo contenente il brodo sterilizzato. Va bene un barattolo modificato come per i cereali, solo che all'interno metti il brodo che usi generalmente per l'agar senza l'aggiunta di agar agar. Fanne magari un paio di barattoli nel caso che si contamini (molto facile). Se non hai l'agitatore magnetico, puoi aggiungere dei pezzetti di vetro o delle biglie, aiutano quando devi agitare. Una volta fatto il trasferimento aspetti e vedrai l'acqua riempirsi di micelio bianco sospeso. Se diventa opaca, è una contaminazione batterica e puoi buttare tutto. Fai un po' di prove, al massimo puoi inoculare un po' di cereali con l'agar, che lì vai sul sicuro, e poi alcuni con la LC. Il problema con la coltura liquida è che se è contaminata ti contamina ogni singolo barattolo. A tal proposito ti consiglio di testarla su agar, a colonizzazione completa, per assicurarti non contenga altro oltre al fungo. Ne prelevi un po' con un loop di inoculazione o la punta di un bisturi e strisci su agar.

Ottimo, ti ringrazio. Ieri sera ho effettuato il 2o tranfer di 4 piastre. Una piastra vergine si era ahimè contaminata per i fatti suoi,anche se è meglio averlo scoperto prima di inoculare.

Ora aspettiamo e vediamo, ho fatto in modo di prendere pezzetti grandi come chicchi e messi al centro della piastra, mi piacerebbe che vengano carini anche esteticamente ahahah

Grazie mille ragaz!

[Terenzio_Terenzio]

Eccoci qui, altro piccolo update.
Purtroppo le piastre su cui ho fatto i transfer l'altro giorno non mi sembrano andare bene come il precedente transfer, anzi su 4, 2 sicuramente hanno una buona quantità di contam sull'agar, quindi toccherà fare un ulteriore transfer.

Mi è sembrato che il problema più grosso sia dovuto a come ho messo via le piastre che non ho usato subito: quelle usate dopo il maggior lasso di tempo dalla preparazione, quindi quelle rimaste in frigo di più e a testa in giù (ERRORE che non farò più), sono quelle che mi hanno dato i peggiori risultati so far, a parità di metodologia di inoculazione, che sicuramente ha ancora da essere perfezionata.

Quindi, alla fine, come posso tenere le piastre vergini in maniera sicura? nel frigo a testa in su non si rovinano? fuori dal frigo, senza farmi problemi? in quest'ultimo caso sempre a testa in sù?
Non ho modo e tempo di poter fare ogni volta una quantità di agar per l'uso immediato, lavorando ed essendo a casa la sera dopo le 19, tra preparare, sterilizzare e aspettare che raffreddi si fanno le ore piccole e tiro le bestemmie, quindi preferisco preparare 25 piastre in un colpo solo e usarle nel tempo.

ciao e grazie!

[asklepios]

Quindi, alla fine, come posso tenere le piastre vergini in maniera sicura? nel frigo a testa in su non si rovinano? fuori dal frigo, senza farmi problemi? in quest'ultimo caso sempre a testa in sù?

Ehi,
Io come ti ho detto non ho esperienza in quel senso, ma leggendo su siti di venditori di piastre preversate, alcuni suggeriscono di conservarle in frigo, altri fuori dal frigo. Idealmente, se hai fatto le cose per bene, dovresti poterle conservare senza problemi fuori dal frigo, soprattutto se il medium che usi non contiene vitamine o altri composti poco stabili. Certo nel frigo vai sul sicuro, in quanto eventuali batteri, se pochi, impiegano più tempo a crescere. Sul fatto del testa in su o testa in giù, ho letto che tenerle a testa in giù le asciuga, e le ho sempre tenute a testa in su.

[Terenzio_Terenzio]

Quindi, alla fine, come posso tenere le piastre vergini in maniera sicura? nel frigo a testa in su non si rovinano? fuori dal frigo, senza farmi problemi? in quest'ultimo caso sempre a testa in sù?

Ehi,
Io come ti ho detto non ho esperienza in quel senso, ma leggendo su siti di venditori di piastre preversate, alcuni suggeriscono di conservarle in frigo, altri fuori dal frigo. Idealmente, se hai fatto le cose per bene, dovresti poterle conservare senza problemi fuori dal frigo, soprattutto se il medium che usi non contiene vitamine o altri composti poco stabili. Certo nel frigo vai sul sicuro, in quanto eventuali batteri, se pochi, impiegano più tempo a crescere. Sul fatto del testa in su o testa in giù, ho letto che tenerle a testa in giù le asciuga, e le ho sempre tenute a testa in su.

Grazie mille, come sempre!

In questi giorni ho capito di avere delle parti del procedimento da perfezionare, sulle quali lavorerò settimana prossima: fare l'agar fatto bene (il primo era troppo pastoso, e pieno di sedimenti fin da subito, ho visto che il MEA agar una volta fatto è cristallino, non torbido, mentre il mio era super torbido e pieno di piccoli sedimenti) e fare il pouring fatto bene.

A presto!

[asklepios]

Buon lavoro!

[Terenzio_Terenzio]

Buon lavoro!

Ieri sera ho voluto preparare dell'agar, di cui farò il pouring questa sera, dopo lavoro.

Siccome il primo fatto era torbido e non limpido, ho provato a seguire i consigli di BOD, seguendo la sua comprehensive tek su shroomery, avendo in casa l'estratto di malto e non le patate.

Come precauzione ulteriore ho setacciato il malto e ho tenuto in pentola a pressione a 15psi per 20 minuti, contro i 30/35 minuti della volta precedente (BOD parlava di possibile caramellizzazione del composto se tenuto oltre i 20min).

Eppure non è cambiato assolutamente niente. Ho ancora un grande sedimento scuro, quasi sembra sabbia "nera" e scura in generale, e l'agar è super torbido, con particelle di malto o di agar (questo non so) in sospensione. giusto la bottiglia mi piace, è molto comoda.

ho una foto: https://ibb.co/jLTk1R4

Lo userò lo stesso in quanto sò che funziona, ma vorrei capire perchè mi viene una m*rda. Idee? Ho pensato possa essere colpa della materia prima, alla fine è l'unica cosa che non ho cambiato (avrei dovuto variare un parametro alla volta, e non due, ma il setacciare il malto mi è sembrato inutile, una volta fatto, quindi prendo come unica variabile la differente durata della sterilizzazione).

Buon lunedì!

[asklepios]

Che strano! Il sedimento c'è anche prima della sterilizzazione o solo a sterilizzazione avvenuta?

[Terenzio_Terenzio]

Che strano! Il sedimento c'è anche prima della sterilizzazione o solo a sterilizzazione avvenuta?

anche prima! appena miscelo tutto in acqua calda, anche dopo un momento che mixo, c'è. Non cambia tra prima e dopo sterilizzazione, per quello mi viene il dubbio che stia usando le materie prime sbagliate

[asklepios]

Ma hai la polvere premischiata, giusto? C'è l'agar e l'estratto di malto tutto insieme?

[Terenzio_Terenzio]

Ma hai la polvere premischiata, giusto? C'è l'agar e l'estratto di malto tutto insieme?

No, ho agar e malto separati, nello specifico questi:
malto : https://www.amazon.it/gp/product/B07CQ5 ... UTF8&psc=1
agar : https://www.amazon.it/gp/product/B0864Z ... UTF8&psc=1

[asklepios]

Vedo che il tuo malto contiene farina, che non è propriamente solubile in acqua, penso sia per quello. Al massimo prova a preparare prima acqua e malto e a lasciar decantare la notte in frigo, vedi se riesci a ottenere una soluzione limpida

[Terenzio_Terenzio]

Vedo che il tuo malto contiene farina, che non è propriamente solubile in acqua, penso sia per quello. Al massimo prova a preparare prima acqua e malto e a lasciar decantare la notte in frigo, vedi se riesci a ottenere una soluzione limpida

ah, interessante. Non ho manco letto gli ingredienti, che babbo! Per quanto riguarda lo scopo, anche se contiene farina funziona bene? Io so che funziona in quanto già usato, ma mi chiedo se una miscela del genere possa essere più o meno a rischio contam, o se non cambia nulla.

come sempre, grazie delle dritte!

[asklepios]

I funghi crescono su qualsiasi cosa. Per fare il PDA (potato dextrose agar) ad esempio io faccio bollire le patate, nel modo tradizionale, ma molti so che usano il purè istantaneo al posto delle patate e lasciano il sedimento. Una volta che sterilizzi non dovrebbe creare problemi. Per la coltivazione delle orchidee su agar ad esempio e nella coltura meristematica si usa l'omogenato di banana, che non penso sia fine come la farina. Alcuni fanno l'agar usando direttamente la farina di riso (brf), seguendo la logica che se si usa per la PFTek si può usare anche per l'agar.

[Terenzio_Terenzio]

I funghi crescono su qualsiasi cosa. Per fare il PDA (potato dextrose agar) ad esempio io faccio bollire le patate, nel modo tradizionale, ma molti so che usano il purè istantaneo al posto delle patate e lasciano il sedimento. Una volta che sterilizzi non dovrebbe creare problemi. Per la coltivazione delle orchidee su agar ad esempio e nella coltura meristematica si usa l'omogenato di banana, che non penso sia fine come la farina. Alcuni fanno l'agar usando direttamente la farina di riso (brf), seguendo la logica che se si usa per la PFTek si può usare anche per l'agar.

Bene, buono a sapersi. Ieri sera ho fatto il pouring ma ho avuto problemi con la miscela: l'ho resa liquida col microonde(mille bestemmie perchè non si scioglieva), e quando ho fatto il pouring alcune piastre hanno dei grumi. Tutto sommato non dovrebbe essere un super problema. Per lo meno la temperatura era migliore della prima volta in termini di condensa sulle piastre.

Ho lasciato tutto in SAB e stasera provvedo ai transfer. Se poi metto in frigo tutto, la crescita posso riprenderla tra un paio di settimane tirando fuori a temperatura ambiente giusto?

[asklepios]

Io subito dopo al transfer aspetterei un paio di giorni per mettere al micelio di riprendersi prima di mettere in frigo, ma puoi comunque provare a vedere. Magari fai metà e metà