Agar. Tecnica trasferimenti

Coltivazione e conservazione di funghi e tartufi
Rispondi
GuevaraBugatti
Messaggi: 8
Iscritto il: mar dic 11, 2018 6:59 pm

Agar. Tecnica trasferimenti

Messaggio da GuevaraBugatti » dom ott 10, 2021 7:02 pm

https://ibb.co/Fng19MC
https://ibb.co/x8KMf9p
https://ibb.co/TmVHfNh
https://ibb.co/XZdMS9j

Ciao a tutti!

Vorrei il vostro parere sulla situazione delle mie piastre di Petri.
Le prime foto sono di 3 piastre dove ho fatto germinare direttamente delle spore in fiala.
Poi ho fatto un trasferimento da quella più promettente ad altre 5 vergini.

https://ibb.co/dGWQkx6
https://ibb.co/Vgj2kKS
https://ibb.co/G3cKr4h
https://ibb.co/b28g8w5
https://ibb.co/PrN30yN

Secondo voi quello presente nelle foto è micelio sano?
Come mi consigliate di procedere nel caso sia sano?
Aspetto che colonizzi tutta la piastra ed inoculo direttamente nei granì o faccio altri trasferimenti?
Grazie in anticipo per il vostro aiuto.

Ps: spero di aver postato nella sezione giusta, non sono molto pratico dei forum in generale.


Avatar utente
asklepios
Messaggi: 3489
Iscritto il: mer gen 01, 2020 7:56 pm

Re: Aiuto identificazione agar agar

Messaggio da asklepios » lun ott 11, 2021 12:00 am

Ha una consistenza strana, molto disordinata. Sembra muffa. Le piastre da cui hai trasferito, che odore avevano? Dovrebbero avere un odore di funghi, leggero ma percepibile, soprattutto se disturbi con un dito la superfice del micelio. Se non sei sicuro lascerei il micelio crescere e vedere come si comporta. Se è una muffa come penso colonizzerà molto velocemente e diventerà nera. In caso contrario potrebbe essere micelio

GuevaraBugatti
Messaggi: 8
Iscritto il: mar dic 11, 2018 6:59 pm

Re: Aiuto identificazione agar agar

Messaggio da GuevaraBugatti » lun ott 11, 2021 6:43 am

Grazie per la tua risposta.
In un primo momento non avevo sentito l’odore perché era mia intenzione conservare la piastra madre.
Dopo il tuo consiglio l’ho aperta e l’odore è di fungo senza alcun dubbio.
Se i trasferimenti non si contaminano prima di aver colonizzato tutta la piastra inoculo direttamente o mi consigli di fare un altro transfert per sicurezza?
Ne approfitto per chiederti un’altra cosa: com’è questa storia dei trasferimenti? Ad ogni trasferimento pulisci da eventuali contaminazioni ma il micelio si indebolisce?
Quanti trasferimenti è bene fare prima di inoculare?
Come comportarsi per avere una banca di micelio?
Grazie ancora per il tuo aiuto

Avatar utente
asklepios
Messaggi: 3489
Iscritto il: mer gen 01, 2020 7:56 pm

Re: Aiuto identificazione agar agar

Messaggio da asklepios » lun ott 11, 2021 11:47 pm

Dopo il tuo consiglio l’ho aperta e l’odore è di fungo senza alcun dubbio.
Meno male. Il micelio, per quanto possa essere sempre bianco, presenta textures molto variabili e non è facile dire con certezza che si tratta di micelio buono finché non lo fai fruttificare. Stiamo a vedere
Se i trasferimenti non si contaminano prima di aver colonizzato tutta la piastra inoculo direttamente o mi consigli di fare un altro transfert per sicurezza?
Almeno due transfer dalla piastra di germinazione io li farei, non si sa mai. È improbabile che un contaminante si mostri adesso, ma male non fa
com’è questa storia dei trasferimenti? Ad ogni trasferimento pulisci da eventuali contaminazioni ma il micelio si indebolisce?
Quanti trasferimenti è bene fare prima di inoculare?
È una domanda che mi sono posto anch'io. Leggendo su Shroomery pare che il micelio non si indebolisca particolarmente facendo solo trasferimenti su agar, e possono servirne decine prima di raggiungere un isolato (genetica singola, che spesso è poco fruttuosa). Questo perché la quantità di divisioni cellulari che avvengono sono relativamente contenute. Quando invece coltivi e lasci che il micelio colonizzi un substrato, ci sono molte più divisioni, e aumentano le probabilità di mutazioni non volute e senescenza. Per questo in genere si sconsiglia di clonare ripetutamente (cioè se prendi un clone poi non cloni nuovamente quello che raccogli dopo averlo cresciuto, piuttosto riparti dalle spore). La formazione di spore e la conseguente riproduzione sessuata (se così la si può chiamare) porta a un rimescolamento e quindi previene la senescenza. Tieni presente che quello che ti dico è preso da Shroomery, non da una rivista scientifica, quindi sono solo teorie basate su osservazioni pratiche (almeno credo).
Come comportarsi per avere una banca di micelio?
Ti linko un topic su Shroomery che lo spiega bene:
https://www.shroomery.org/forums/showfl ... r=25911960
Se poi se interessato a preparare slants ti posso linkare delle altre guide (o se cerchi ne trovi in abbondanza). Finché non hai un clone che vuoi proprio preservare comunque non è fondamentale, le piastre di Petri (senza legno) in frigo possono durarti anche un anno senza doverle trasferire

GuevaraBugatti
Messaggi: 8
Iscritto il: mar dic 11, 2018 6:59 pm

Re: Aiuto identificazione agar agar

Messaggio da GuevaraBugatti » mar ott 12, 2021 3:22 am

Grazie mille!
Sei un pozzo di scienza!
Grazie per la guida la leggerò con calma dato che a differenza dello spagnolo e del francese, l’inglese mi è più ostico.
Ti terrò aggiornato su come procede.
Nel frattempo ho 3 Jar di mais( lo so che non è il massimo ma in Martinica la segale te la scordi!) da 1kg l’uno già inoculati direttamente con le spore, fatti allo stesso tempo delle prime tre piastre
Uno è partito alla grande, gli altri due sono più lenti.
Prevedo di fare un g2g prima di fruttificare e se tutto va bene clonare i frutti più promettenti
Spero da qui ad un mese di consumare i miei McKennaii, ti riserverò un pensiero di gratitudine durante il viaggio

Avatar utente
asklepios
Messaggi: 3489
Iscritto il: mer gen 01, 2020 7:56 pm

Re: Aiuto identificazione agar agar

Messaggio da asklepios » mar ott 12, 2021 10:42 pm

Incrociamo le dita! L'inoculazione di cereali direttamente con spore contamina più spesso, ma se sei fortunato e hai fatto le cose per bene ti puoi aspettare un'ottima resa

Grim
Messaggi: 25
Iscritto il: mar ott 12, 2021 1:42 pm

Re: Agar. Tecnica trasferimenti

Messaggio da Grim » ven ott 29, 2021 4:07 pm

Ho delle domande sul lato più pratico nell'ottica della conservazione dell'agar e sui trasferimenti. Premetto che ho intenzione di farlo sui Petri di vetro e sterilizzarli in pentola a pressione assieme all'agar in bottiglia. Pensavo di usare 10 Petri di vetro, di cui 5 per la germinazione e 5 per il trasferimento successivo. Poi li metto in sab e faccio la germinazione con le spore. Ed ecco le domande:
-conviene versare l'agar subito in tutti i Petri anche in quelli dove dovrò fare il poi il trasferimento? Il dubbio viene nell'ottica di a) conservazione dei Petri, come e dove si conservano e per quanto b) so che il trasferimento così come la prima germinazione vanno fatte con l'agar non solidificato a temp più alte di quelle ambientali, se io ho già versato l'agar sarà solido e dovrei prima riscaldarlo e non saprei come, non mi sembra una grande idea.
Questo mi porta all'altra domanda
- la bottiglia di agar sterilizzata è riutilizzabile? Se si, per quanto e come la devo conservare? Devo sterilizzarla di nuovo prima di riutilizzarla?

Avatar utente
asklepios
Messaggi: 3489
Iscritto il: mer gen 01, 2020 7:56 pm

Re: Agar. Tecnica trasferimenti

Messaggio da asklepios » sab ott 30, 2021 12:28 am

Grim ha scritto:
ven ott 29, 2021 4:07 pm
-conviene versare l'agar subito in tutti i Petri anche in quelli dove dovrò fare il poi il trasferimento? Il dubbio viene nell'ottica di a) conservazione dei Petri, come e dove si conservano e per quanto
Io in genere preparo l'agar quando mi serve, ma nulla ti vieta di farlo tutto in una volta. L'importante è poi sigillare bene le piastre per evitare che l'aria ci entri e le contamini. Le puoi tenere in frigo o in teoria anche temperatura ambiente, se hai fatto le cose per bene dovrebbero essere sterili
b) so che il trasferimento così come la prima germinazione vanno fatte con l'agar non solidificato a temp più alte di quelle ambientali
No, l'agar deve essersi raffreddato e completamente solidificato al momento di usarlo, tant'è che nelle guide consiglio di lasciarlo raffreddare nottetempo per risparmiare tempo
- la bottiglia di agar sterilizzata è riutilizzabile? Se si, per quanto e come la devo conservare? Devo sterilizzarla di nuovo prima di riutilizzarla?
Sì certo si può riutilizzare, ho anche allegato una foto nella guida della bottiglia che consiglio di comprare. Intendi con l'agar ancora dentro? Vale lo stesso discorso che per le piastre. Se si chiude bene e non si contamina puoi riutilizzare l'agar all'interno (che dovrà essere quanto meno sciolto). Personalmente ti consiglierei di fare l'agar quando ti serve comunque, ne prepari la quantità di cui hai bisogno e al massimo conservi le piastre già versate e pronte da usare

Grim
Messaggi: 25
Iscritto il: mar ott 12, 2021 1:42 pm

Re: Agar. Tecnica trasferimenti

Messaggio da Grim » lun nov 15, 2021 7:42 pm

Domenica ho fatto il mio primo tentativo con l'agar. Spero vada tutto bene, non ho capito bene come si deve conservare nella fase di germinazione. Io l'ho lasciato in sab con le due bocche chiuse e una lampada alogena (che punta dalla parte opposta dell'agar) ma che fa calore, la temperatura è stabile sui 22, sul vetrino c'è parecchia condensa però. Ho sbagliato?

Avatar utente
asklepios
Messaggi: 3489
Iscritto il: mer gen 01, 2020 7:56 pm

Re: Agar. Tecnica trasferimenti

Messaggio da asklepios » lun nov 15, 2021 8:59 pm

L'agar una volta che hai chiuso la piastra con parafilm/pellicola trasparente lo puoi mettere dove vuoi, a patto che non faccia troppo freddo o troppo caldo. La condensa può essere dovuta a temperatura troppo alta nel posto dove ce l'hai (ma dovrebbe essere proprio sopra un termosifone), o più probabilmente hai versato l'agar quando era ancora troppo caldo. Un trucco che aiuta a ridurre la condensa, oltre che a versare a temperature più basse, è impilare le piastre una sopra l'altra e in cima magari (se ci sta) mettere la bottiglia dell'agar o una tazza con dell'acqua bollente/bella calda. La condensa deriva dal fatto che i coperchi (comprensibilmente) si raffreddano prima del resto della piastra. Impilare le piastre aiuta a farle raffreddare in maniera uniforme, riducendo di molto la condensa. Se non le hai ancora chiuse, o magari ne hai giusto una o due che sono piene di condensa, puoi mettere sempre una tazza con acqua bollente sul coperchio e far evaporare la condensa. In genere comunque non è troppo problematico avere condensa, impedisce solo di vedere bene (puoi comunque guardare da sotto). Da evitare sarebbe la condensa che è tanta che nuota sulla superficie dell'agar, in quel caso se ci fossero contaminanti li spargerebbe dappertutto rendendo impossibile isolarli

Grim
Messaggi: 25
Iscritto il: mar ott 12, 2021 1:42 pm

Re: Agar. Tecnica trasferimenti

Messaggio da Grim » mar nov 16, 2021 11:52 am

Il versamento l'ho fatto a 48 gradi come da istruzioni, ho usato un termometro. La tecnica vasetto l'avevo sentita ma non avevo un vasetto abbastanza piccolo da metterci sopra..una tazza a caso non gliela metterei xké non è sterile, mentre alla bottiglietta di agar non ci avevo pensato, magari per la prossima volta :cry: .
Cmq cosa intendi con troppo freddo o troppo caldo? 18/19 gradi sarebbero sufficienti? Perché nel caso spegnerei la lampada

Avatar utente
asklepios
Messaggi: 3489
Iscritto il: mer gen 01, 2020 7:56 pm

Re: Agar. Tecnica trasferimenti

Messaggio da asklepios » mar nov 16, 2021 11:16 pm

Tieni presente che l'unica cosa veramente sterile all'interno della SAB è l'interno delle piastre. Il coperchio non lo è, come non lo sarà l'ambiente con cui il coperchio verrà a contatto una volta che estrai le piastre dalla SAB. Il fatto di entrare in contatto con cose non sterili (come l'eventuale tazza) non dovrebbe inficiare la sterilità, a patto che le piastre restino chiuse. Prova a usare tutti gli accorgimenti che ti ho detto, soprattutto quello di impilarle, e dovrebbe ridursi di molto la condensa. C'è anche da considerare che una cosa è passare da 48 °C ad una temperatura ambiente di 28 °C in estate, una cosa è passare da 48 a 18. Essendo maggiore la differenza tra la temperatura ambiente e quella delle piastre si crea naturalmente più condensa. 18/19 gradi non sono troppi, io ho un incubatore che tengo a 28 °C (si parla di piastre già inoculate) per le Petri quindi puoi stare tranquillo che troppo caldo non fa. Troppo caldo è se le metti proprio sopra il termosifone e l'agar si scalda al punto che evapora tutta l'acqua e condensa sul coperchio

Grim
Messaggi: 25
Iscritto il: mar ott 12, 2021 1:42 pm

Re: Agar. Tecnica trasferimenti

Messaggio da Grim » mer nov 17, 2021 9:47 am

No no, chiedevo se erano troppo pochi, non troppi 18/19 :D Xké se bastano per la diffusione del micelio spengo la lampada che li sta tenendo a 22/23. Anche le mie sono già inoculate, ci ho messo le spore appena si è solidificato, l'ho fatta subito dopo due orette.. non so se ho fatto bene o dovevo aspettare di più ma ero preoccupato del fatto che si indurisse troppo, ho letto che deve essere un po' morbidino perché si diffonda il micelio. Al momento sono passati 3 giorni e ancora non c'è nessuna traccia di bianco ma credo sia normale. Cmq allora oggi provo la cosa con la tazza! Grazie

Avatar utente
asklepios
Messaggi: 3489
Iscritto il: mer gen 01, 2020 7:56 pm

Re: Agar. Tecnica trasferimenti

Messaggio da asklepios » mer nov 17, 2021 1:27 pm

22/23 vanno meglio. Soprattutto per far germinare le spore, temperature troppo basse potrebbero allungare enormemente i tempi di germinazione e potresti non vedere mai nulla. Dopo due ore l'agar dovrebbe avere già raggiunto la sua consistenza finale. Non ti consiglio di usarlo prima di due ore, meglio lasciarlo raffreddare opportunamente. Il discorso dell'agar un po' più morbido è valido, ma non lo ottieni usandolo quando è ancora caldo, ma semplicemente usando meno polvere di agar agar. È la consistenza finale che deve risultare più morbida.

Anaxus
Messaggi: 149
Iscritto il: ven dic 28, 2018 1:25 pm

Re: Agar. Tecnica trasferimenti

Messaggio da Anaxus » ven gen 21, 2022 12:27 am

Il micelio che avete nelle diverse piastre di petri lo tenete o lo buttate una volta trasferito? Ho fatto nascere del micelio sue tre piastre e due si sono contaminate e la crescita del micelio si è bloccata mentre nella terza è rigoglio e pulito alla parvenza ma solo da quest'ultimo farò dei trasferimenti per pulirlo ulteriormente.
Una volta trasferito cosa mi consigliate di fare con l'agar in cui sono nate le spore? Non penso che abbia senso tenerlo di scorta una volta che ho eseguito più trasferimenti di successo e mi libererebbe una piastra in borosilicato, però mi scoccerebbe buttarlo via per quanto è bello.
:D

Avatar utente
asklepios
Messaggi: 3489
Iscritto il: mer gen 01, 2020 7:56 pm

Re: Agar. Tecnica trasferimenti

Messaggio da asklepios » ven gen 21, 2022 12:42 am

Una volta che hai trasferito, non serve più a molto. Non lo puoi usare per inoculare, se i trasferimenti sono cresciuti io lo butterei

Rispondi