Contaminazione agar?

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Re: Contaminazione agar?

Messaggio da albert ergot » mar mag 09, 2023 11:57 pm

asklepios ha scritto:
mar mag 09, 2023 11:05 pm
Più che altro dalla foto non si capisce dove sia il pezzo di agar. Vedo tanti filamenti, ma da dove partono? L'agar è sotto?
Forse non è chiaro dalle foto perché ho riempito troppo i barattoli, ma il pezzo di agar è comunque presente in entrambe, il bianco sopra il miglio è l'agar colonizzato, non è polyfill, quello non si vede.
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Re: Contaminazione agar?

Messaggio da albert ergot » mar mag 16, 2023 1:28 pm

Aggiornamenti, forse era solamente un fatto di tempo/temperatura. Ho messo i barattoli ad incubare ad una temperatura target di 25 °C, adesso dopo un'altra settimanella, il micelio sembra che stia timidamente crescendo, sta spuntando infatti verso le pareti del barattolo.

Io mi sarei aspettato di vederlo prima espandere dal pezzo di agar, poi verso le pareti del barattolo, un po' tipo le tortine della PK-tek, ma ok...

Solo che controllando i barattoli oggi ho notato questa macchia scura in uno di essi. Beh pare proprio qualche contaminazione, ha senso aspettare e vedere come si comporta o meglio sbarazzarsi del barattolo perché tanto inutilizzabile?

Immagine

Per confronto, una simile macchia di (credo?) micelio:

Immagine
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Re: Contaminazione agar?

Messaggio da asklepios » mar mag 16, 2023 9:40 pm

Il primo è contaminato di sicuro (da buttare), e missà anche il secondo. Come hai fatto la sterilizzazione?

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Re: Contaminazione agar?

Messaggio da albert ergot » mer mag 17, 2023 11:02 am

asklepios ha scritto:
mar mag 16, 2023 9:40 pm
Il primo è contaminato di sicuro (da buttare), e missà anche il secondo.
Hmm, quello che si vede nella seconda immagine (è lo stesso barattolo) mi pare la stessa cosa che scende dall'agar...
Come hai fatto la sterilizzazione?
Ho sterilizzato i barattoli per 2 ore in pentola a pressione, li ho tenuti sopra il livello dell'acqua e con la parte superiore avvolta nella stagnola. Come pentola ho usato la Hawkins Bigboy 22 l che dovrebbe raggiungere 15 PSI secondo le FAQ:
What is the pressure/temperature inside the Hawkins pressure cooker?

Pressure: 15 PSI (pounds per square inch); Temperature: 121ºC (250ºF)
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Re: Contaminazione agar?

Messaggio da asklepios » mer mag 17, 2023 1:11 pm

Secondo me ha un andamento troppo filamentoso e "arioso" per essere micelio, più probabile sia qualche muffa. Una volta sui cereali in genere il micelio è più bianco e fitto. Puoi tenerlo nel dubbio e vedere cosa vien fuori, ma nel frattempo io riprenderei dall'agar. Se effettivamente è la stessa cosa che hai su agar, germina delle nuove spore. Mi sembra strano però che abbia un distinto odore di funghi, sei sicuro di questo? Quello che mi preoccupa comunque è anche il primo vasetto. Il fatto che ci sia una contaminazione del genere dopo 2 ore di pentola a pressione non è normale. O è una questione di tecnica, o magari i coperchi non hanno abbastanza polyfill ed è entrato qualcosa

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Re: Contaminazione agar?

Messaggio da albert ergot » mer mag 17, 2023 1:30 pm

asklepios ha scritto:
mer mag 17, 2023 1:11 pm
Mi sembra strano però che abbia un distinto odore di funghi, sei sicuro di questo?
Sì, ma questo sentendolo dalle piastre avanzate dopo l'inoculazione dei barattoli, l'odore è lo stesso per tutti, non è forte ma ricorda decisamente funghi, è un odore piacevole comunque.
Quello che mi preoccupa comunque è anche il primo vasetto. Il fatto che ci sia una contaminazione del genere dopo 2 ore di pentola a pressione non è normale. O è una questione di tecnica, o magari i coperchi non hanno abbastanza polyfill ed è entrato qualcosa
Se è una questione di tecnica non saprei allora come migliorarla questa volta, ho fatto molta attenzione. Il polyfill sporge sia dentro che fuori dal coperchio in due bei batuffoli che ho un po' appiattito e compattato; credo vada bene. L'unica cosa che posso pensare, è che è stato lo scuotere troppo presto quei barattoli per cercare di posizionare meglio l'agar (come qualcuno mi ha suggerito su Shroomery) facendo venire a contatto il miglio con qualcosa proveniente dal filtro, ma mi pare strano...

Posso provare a fare un'altra mandata ancora, ripartendo questa volta dalla germinazione e utilizzando un'impronta invece che la siringa. Mi pare strano comunque che (contaminazione scura a parte) sto facendo consistentemente crescere questa muffa bianca da agar germinato a agar trasferito a barattoli.
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Re: Contaminazione agar?

Messaggio da asklepios » mer mag 17, 2023 10:23 pm

albert ergot ha scritto:
mer mag 17, 2023 1:30 pm
Posso provare a fare un'altra mandata ancora, ripartendo questa volta dalla germinazione e utilizzando un'impronta invece che la siringa. Mi pare strano comunque che (contaminazione scura a parte) sto facendo consistentemente crescere questa muffa bianca da agar germinato a agar trasferito a barattoli.
A me quando ho iniziato è successa la stessa identica cosa. E non ti immagini che meraviglia nel vedere quella muffa bianca colonizzare l'intero barattolo in pochi giorni. Detto questo, io farei così: tieni da parte il secondo barattolo, chissà che non sia un micelio particolarmente anomalo. Nel frattempo riparti dalla germinazione, quindi prepara nuovi barattoli riempiendoli molto di meno e inoculali col nuovo agar. Non ti scoraggiare, è normale che all'inizio vada male, ma hai tutte le carte in regola per raccogliere diversi chili quando ti andrà bene. Come suggerisco sempre, anche dato che hai una pentola a pressione come si deve, prepara più barattoli possibile, in modo da salvaguardarti da eventuali fallimenti.

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Re: Contaminazione agar?

Messaggio da albert ergot » mer mag 17, 2023 11:55 pm

asklepios ha scritto:
mer mag 17, 2023 10:23 pm
A me quando ho iniziato è successa la stessa identica cosa. E non ti immagini che meraviglia nel vedere quella muffa bianca colonizzare l'intero barattolo in pochi giorni.
Ugh! Certo se fosse davvero questo il caso vuol dire che di micelio qui non c'è nulla perché tutti i barattoli hanno quell'aspetto. Se fosse davvero colpa della siringa (che comunque ho usato con successo per la PF-tek mesi fa) mi chiedo davvero come ha fatto a generare le contaminazioni verdi sull'agar all'inizio di questo thread e ora pure questa bianca...
Detto questo, io farei così: tieni da parte il secondo barattolo, chissà che non sia un micelio particolarmente anomalo. Nel frattempo riparti dalla germinazione, quindi prepara nuovi barattoli riempiendoli molto di meno e inoculali col nuovo agar.
Sì conto di provare a vedere che succede con questi barattoli, buttando quelli palesemente contaminati (per ora solo quella macchia in foto).

Oggi ho inoculato altre 6 piastre con un'impronta che avevo, vediamo cosa succede...

Tra l'altro indovinare la quantità di miglio da mettere nei barattoli non è affatto facile, anche la seconda mandata di barattoli mi sono venuti un po' troppo pieni perché ho ammollato questa volta per 24 ore e a quanto pare la sterilizzazione l'ha fatto crescere più della prima. Inoltre sta volta ho dato una prima shakerata ai barattoli prima di inoculare per ridistribuire i grani e questo anche li ha resi meno compatti. Credo che la prossima volta starò molto sotto con il livello di miglio.
Non ti scoraggiare, è normale che all'inizio vada male, ma hai tutte le carte in regola per raccogliere diversi chili quando ti andrà bene. Come suggerisco sempre, anche dato che hai una pentola a pressione come si deve, prepara più barattoli possibile, in modo da salvaguardarti da eventuali fallimenti.
Grazie per le parole di conforto :) No scoraggiato no, anche per tutto il tempo e risorse investite, però è estremamente frustrante, più che altro perché mi sento un po' col fiato sul collo, che il periodo giusto sono questi pochi mesi prima che diventi troppo caldo.
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Re: Contaminazione agar?

Messaggio da asklepios » dom mag 21, 2023 9:13 pm

albert ergot ha scritto:
mer mag 17, 2023 11:55 pm
Ugh! Certo se fosse davvero questo il caso vuol dire che di micelio qui non c'è nulla perché tutti i barattoli hanno quell'aspetto. Se fosse davvero colpa della siringa (che comunque ho usato con successo per la PF-tek mesi fa) mi chiedo davvero come ha fatto a generare le contaminazioni verdi sull'agar all'inizio di questo thread e ora pure questa bianca...
Le contaminazioni sono dappertutto nell'aria. Avere una still air box è come cercare di fare un origami nella vasca da bagno senza bagnarlo, possibile ma non garantito. La sorpresa non è quando le contaminazioni ci sono, ma quando non ci sono.
Tra l'altro indovinare la quantità di miglio da mettere nei barattoli non è affatto facile, anche la seconda mandata di barattoli mi sono venuti un po' troppo pieni perché ho ammollato questa volta per 24 ore e a quanto pare la sterilizzazione l'ha fatto crescere più della prima. Inoltre sta volta ho dato una prima shakerata ai barattoli prima di inoculare per ridistribuire i grani e questo anche li ha resi meno compatti. Credo che la prossima volta starò molto sotto con il livello di miglio.
Io non ho mai usato miglio puro da che ricordi, ma con il mangime per uccelli (che è per la maggior parte miglio) riempivo a metà il barattolo, e dopo la sterilizzazione e agitazione si gonfiava fino a tre quarti.
Grazie per le parole di conforto :) No scoraggiato no, anche per tutto il tempo e risorse investite, però è estremamente frustrante, più che altro perché mi sento un po' col fiato sul collo, che il periodo giusto sono questi pochi mesi prima che diventi troppo caldo.
Prima che arrivino a esserci 35 gradi in casa ne hai di tempo, magari in pieno agosto, e anche lì non è detto a seconda della casa che hai

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Re: Contaminazione agar?

Messaggio da albert ergot » mar mag 30, 2023 2:36 pm

Scrivo più per condividere e informare che per chiedere, sono sempre pochi i thread con immagini chiare di quello che le cose dovrebbero o non dovrebbero sembrare, così uno può fare il confronto con quello che ha sotto mano.

In questo barattolo che ho buttato oggi, credo si veda chiaramente la differenza tra micelio (bianco, rizomorfo) e muffa (grigia, tomentosa):

Immagine

Si vede chiaramente la competizione delle due colonie sui nutrienti. Questo invece è un dettaglio della parte con la muffa:

Immagine

A questo punto credo di aver trasferito sia l'uno che l'altro e che non sia un fattore di contaminazione esterno avvenuto durante l'inoculazione. Nel caso, credo che la soluzione a questi problemi sia fare ulteriori trasferimenti per accertarsi di prendere solo micelio pulito.

Una domanda però ce l'ho, magari non in casi come questo dove la colonia di muffa è considerevole, ma qual è il rischio effettivo di tentare di far fruttificare una cosa del genere? Verranno meno funghi perché la muffa si prende parte dei nutrienti, oppure verranno funghi non buoni? Credo che la risposta dipenda da se questa muffa si nutre di funghi oppure no (mi sembrava di aver letto che esiste anche qualcosa del genere). Tirando completamente a caso, mi verrebbe da dire che visto che adesso si sta nutrendo di miglio, il problema fondamentale sia solamente la competizione per i nutrienti.
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Re: Contaminazione agar?

Messaggio da asklepios » mar mag 30, 2023 10:16 pm

Bella foto, molto indicativa. Molto probabilmente non fruttificherebbe, o frutterebbe molto poco. Non varrebbe lo sforzo penso. Se i funghi nascono sono buoni, nel caso in cui fossero ammuffiti te ne accorgeresti sicuramente. Una cosa che potresti fare se sull'agar non vedi questa chiara distinzione tra i due organismi è prelevare qualche chicco che è stato colonizzato dal micelio e disporlo su una piastra vergine.

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Re: Contaminazione agar?

Messaggio da albert ergot » gio giu 01, 2023 6:45 pm

Un altro piccolo aggiornamento con domanda. Dell'ultimo tentativo di inoculare delle piastre con l'impronta solo due stanno portando avanti qualcosa, come le prime non hanno l'aspetto filamentoso che si vede in molte foto, e anche qui sto notando che c'è un pattern strano, come se ci fossero due colonie? Solo che a parte notare il bordo non vedo grande differenza tra le due. Che ne pensate? Questa volta ho usato l'impronta e non la siringa quindi non ho usato il loop di inoculazione per spargere, imputavo a quello questo pattern strano, ma vedo che si sta presentando anche qui.

Immagine Immagine

(Purtroppo mettere a fuoco il micelio con il telefono è impossibile... ma come dicevo non si vede molta differenza.)
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Re: Contaminazione agar?

Messaggio da asklepios » gio giu 01, 2023 7:14 pm

Io di tutte trasferirei la parte centrale della prima (quella che sembra avere una crescita più regolare) e della seconda quella in basso a destra, anche se non mi convince particolarmente. Una crescita così abbondante e ariosa, ma allo stesso tempo disordinata mi ricorda più una muffa che il micelio

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Re: Contaminazione agar?

Messaggio da albert ergot » dom giu 18, 2023 10:44 pm

Proseguo con questo thread fotografico.

Prima qualche aggiornamento, ho un totale di circa 6-7 barattoli provenienti da due diverse mandate che stanno colonizzando, quasi tutti sembrano avere solo micelio sano e dall'aspetto rizomorfo, alcuni invece un misto, con alcune parti batuffolose, ma il primo sembra essere in netta maggioranza. Conto di provare a farli fruttificare comunque. In parallelo ho provato, come detto in un precedente post, a trasferire le due suddette piastre in altre 6 che hanno più o meno colonizzato senza problemi. Ho voluto provare a usare porzioni diverse delle due piastre del precedente post (parte piccola in basso vs parte grossa in alto) per vedere se avrei notato differenze. Purtroppo non ho ottenuto risultati troppo chiari ma sembra che la parte piccola sia risultata in una piastra migliore...

Detto questo, allego due foto degne di nota. La prima mostra chiaramente una separazione tra due colture, curioso è però il fatto che siano cresciute in questo modo, ovvero in modo concentrico:

Immagine

La seconda invece mostra un fenomeno che avevo già notato in passato con altre piastre, a quanto pare il micelio o alcune sue parti bluificano (come i funghi) se disturbato, infatti in certi casi si poteva notare anche qualcosa nei pressi del pezzo di agar tagliato. Non ho mai letto di questo ma ammetto di non averlo davvero cercato. Vi è mai capitato?

Immagine
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Re: Contaminazione agar?

Messaggio da asklepios » lun giu 19, 2023 10:22 am

Della prima direi che da tenere è sicuramente la parte che cresce in maniera circolare. Il micelio ha sempre questa caratteristica di "scorrere". Cresce in maniera ordinata, filamenti che si espandono verso l'esterno a macchia d'olio, mentre altre muffe crescono in maniera più disordinata e irregolare. La parte più esterna della prima piastra, ad esempio, ricopre un po' tutto e non riusciresti a dire dove inizia e dove finisce, al contrario della parte centrale dove puoi individuare chiaramente il fronte di crescita e espansione.

Personalmente mi pare non mi sia mai capitata una bluificazione del genere su una piastra, ma potrebbe essere un buon segno, chissà.

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Re: Contaminazione agar?

Messaggio da albert ergot » ven lug 21, 2023 11:58 am

Qualche aggiornamento, ho sempre questo problema di questa strana muffa che sembra crescere sopra il micelio, lo vedo chiaramente quando dopo i trasferimenti posso permettermi di analizzare la piastra più da vicino. In questa foto si vede abbastanza bene cosa intendo:

Immagine

La velocità di crescita sembra essere la stessa del micelio. Il fatto che cresce sopra rende il trasferire solo micelio estremamente difficile e frustrante, forse anche impossibile date le mie capacità.

In ogni caso facendo del mio meglio ho messo alla fine a fruttificare i barattoli migliori, e queste sono alcune foto:

Immagine Immagine

Le condizioni di aria e umidità sembrano OK, ma sull'aspetto non sono così convinto, si sono formate quelle palle bianche che non so se siano un buon segno. L'odore ricorda qualcosa relativo a funghi ma non posso dire che sia un odore troppo piacevole.

Comincio a non sapere più dove sbattere la testa...
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Re: Contaminazione agar?

Messaggio da Viaggiatore » ven lug 21, 2023 6:03 pm

A me sembra che il micelio nella scatola di fruttificazione stia bene

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Re: Contaminazione agar?

Messaggio da asklepios » sab lug 22, 2023 9:39 pm

Strano, aspetta a vedere. A volte capita che il micelio stesso abbia delle morfologie strane e si rifiuti di fruttificare. Per l'agar alla peggio cerca di prendere pezzi più piccoli

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Re: Contaminazione agar?

Messaggio da albert ergot » ven ago 04, 2023 10:30 am

Ecco i primi frutti di quella monotub, sono visibilmente strani e piccoli, ma volevo spostare l'attenzione sulla parte batuffolosa che avvolge buona parte del gambo, non sembra proprio normale (specialmente foto 3 e 4). Cosa ne pensate?

Immagine Immagine Immagine Immagine

Chiaramente qui ci sono dei problemi di contaminazione, e se il raccolto rimane così magro posso anche far prima a buttare tutto, ma credete che siano commestibili in queste condizioni?
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Re: Contaminazione agar?

Messaggio da asklepios » sab ago 05, 2023 4:14 pm

Commestibili penso di sì, se hai dubbi fai un tè. La contaminazione secondo me in questo caso potrebbe essere indice di troppa umidità unita a scarso ricambio d'aria. Mi sembra di vedere oltre alla muffa bianca sui gambi anche delle macchie batteriche sui cappelli. Sicuramente aumenta il ricambio d'aria. Alcuni consigliano per questo genere di muffa di spruzzare acqua ossigenata (quella diluita che si trova comunemente dovrebbe andare). Io ho provato una sola volta a utilizzarla e non ha fatto granché, ha solo ritardato la contaminazione che puntualmente è riapparsa. L'importante adesso è in ogni caso cercare di capire da dove sia arrivata

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